多重PCR方法检测锦鲤疱疹病毒基因

根据对已报道的PCR检测方法灵敏性评价,以常用KHV病毒PCR检测的目的基因KHVSphI片段(AY568590)、KHV5/9(AF411803)和KHVTK基因(AJ535112)作为靶基因,设计并选择3对特异性引物建立的多重PCR检测体系用于KHV病毒多基因的检测。本研究建立的多重PCR体系具有较高的特异性,能够特异性扩增出KHVSphI片段290bp、KHV5/9片段484bp和KHVTK基因片段409bp,对锦鲤和鲤鱼的另外一种病毒性病原鲤春毒血症病毒检测结果为阴性。多重KHV病毒PCR体系检测KHVSphI、KHV5/9和KHVTK基因片段单一模板的检测下限分别为:10fg、100fg和100fg,在相同模板浓度的情况下,KHVSphI、KHV5/9和KHVTK基因片段同时被检出的检测下限为100fg。对KHV病毒感染组织的检测结果表明,多重KHV病毒PCR检测结果与常规PCR检测结果基本吻合,在多重PCR检测体系中KHVTK基因片段检测的灵敏度高于检验检疫行业标准方法。结果表明,多重KHV病毒PCR检测方法能够快速、准确和灵敏地检测KHV病毒基因。     

多重PCR检测四种食源性病原弧菌

【目的】建立在扩增内标存在下同时快速检测溶藻弧菌、副溶血弧菌、创伤弧菌、霍乱弧菌4种食源性致病菌的五重PCR方法。【方法】以细菌16S rRNA基因为扩增内标靶序列,针对溶藻弧菌gyrB基因、副溶血弧菌collagenase基因、创伤弧菌vvhA基因、霍乱弧菌ompW基因,分别设计特异性引物,建立多重PCR体系,对其灵敏度和特异性进行评价,并将建立的五重PCR应用于弧菌的筛选。【结果】建立的多重PCR检测体系对混合模板中副溶血弧菌、溶藻弧菌、创伤弧菌的灵敏度达10 CFU/mL,霍乱弧菌的灵敏度达105 CFU/mL,经特异性评价证实其特异性好,并能有效指示PCR反应的假阴性,将建立的多重PCR应用于69株疑似弧菌菌株的鉴定,其结果与生理生化鉴定结果一致。【结论】该方法能够快速、灵敏、准确地检测溶藻弧菌、副溶血弧菌、创伤弧菌和霍乱弧菌4种食源性致病菌,灵敏度高,并能有效指示PCR反应的假阴性,适用于食品中常见致病性弧菌的快速筛检。     

猪日本脑炎病毒NS3基因实时RT-LAMP快速检测方法的建立

建立日本脑炎病毒一步法实时环介导逆转录等温快速扩增方法.根据日本脑炎病毒序列保守的非结构区基因NS3设计4条特异引物,用于扩增SA14-14-2株、SA103株和GD06株日本脑炎病毒获得成功,在病毒感染的单层细胞和猪体内都可以检出病毒.与常规SYBR GreenI适时荧光RT-PCR方法比较和Ct值分析,用不同稀释度病毒RNA,两者敏感性相似,适时RT-PCR在模板浓度低时结果更稳定.FIP和BIP纯度会影响反应效果,反应时间和模板浓度会影响电泳条带.一般63 ℃~65 ℃ 30 min可出现结果,模板浓度低时要适当延长反应时间.以SYBR GreenI为指示剂,RT-LAMP在63 ℃~65 ℃循环扩增检测日本脑炎病毒,1.5 min/循环,30个循环,Ct值为21.5.提示RT-LAMP方法用于日本脑炎诊断、鉴别,是敏感、可靠、成本低廉的方法,有助于人畜日本脑炎的防控工作.     

防治斜纹夜蛾的爪哇拟青霉菌株筛选及培养

防治斜纹夜蛾主要依赖化学防治.为了寻求防治该虫新的有效措施,从自然罹病虫体上分离得到爪哇拟青霉Paecilomyces javanicus （Friedrichs ＆ Bally） Brown ＆ Smith,经室内毒力测定后,筛选出1株对斜纹夜蛾具有较强致病力菌株Px04.时间-剂量-死亡率模型拟合结果表明,26 ℃下幼虫接菌后第10天的LC50为1.722×10^6个孢子/mL.当剂量为10^7个孢子/mL时,致死中时间为3.6 d.在不同温度下,菌丝生长与产孢量均在25 ℃时达到最大.不同培养基对Px04菌株的生长和产孢量具有明显的影响.在26 ℃下采用PD（马铃薯葡萄糖）＋0.5%蛋白胨液体发酵培养3 d,每50 mL培养基的菌丝产量为461.5 mg,高于PD,Czapek-Dox和Cz-P（Czapek-Dox加0.5%蛋白胨）3种培养基;采用大米＋0.2%蛋白胨和碎玉米＋0.2%蛋白胨作为菌株的固相产孢培养料培养28 d,产孢量分别为8.75×10^12和8.38×10^12/kg,高于未加0.2%蛋白胨母体培养料的产孢量.     

溴甲烷对扶桑绵粉蚧的熏蒸处理研究

为建立扶桑绵粉蚧溴甲烷熏蒸处理方法,本文测定了溴甲烷熏蒸2h对扶桑绵粉蚧各虫龄的致死毒力。用机率值分析表明:各虫龄对溴甲烷敏感性不同,以1龄若虫对药剂最敏感,以3龄若虫耐药性最强;在20℃和29.5℃下3龄若虫达到99%死亡率所需CT值分别为44.09 g.h/m3和29.77 g.h/m3,其对应的LC99分别为28.09 g/m3和18.10 g/m3。验证实验表明在21～25℃下以剂量38g/m3,在26～30℃下以剂量25 g/m3熏蒸2h各供试虫龄死亡率均达到100%,该指标可为扶桑绵粉蚧安全检疫处理提供参考。     

16s rDNA文库法分析番石榴果实蝇共生菌组成

[目的]探索分析番石榴果实蝇[ Bactrocera correcta (Bezzi)]的共生菌组成,为进一步探索共生菌的生理功能以及与宿主的协同进化关系奠定基础.[方法]构建番石榴果实蝇室内种群共生菌的16s rDNA文库,BLAST分析其共生菌的组成以及丰度.[结果]室内雄虫共生菌主要为Pseudomonas aeruginosa和Lactococcus lactis,雌虫共生菌主要为Enterobacter属的细菌.[结论]本研究结果证明番石榴果实蝇存在多种共生菌.     

重组酶聚合酶扩增技术(RPA)快速检测玉米褪绿斑驳病毒

玉米褪绿斑驳病毒(maize chlorotic mottle virus,MCMV)是我国颁布的一种禁止进境的检疫性有害生物,自然寄主有玉米、小麦、黍、大麦等。自然情况下,MCMV常与甘蔗花叶病毒(sugarcane mosaic virus,SCMV)、玉米矮花叶病毒(maize dwarf mosaic virus,MDMV)、小麦线条花叶病毒(wheat streak mosaic virus,WSMV)共同侵染玉米,可造成玉米产量损失高达10%~90%(Hilker et al.,2017)。     

观叶植物根际3种短体线虫的记述

2006～2009年,在对深圳市的观赏植物线虫进行调查监测中,采集长势不良的观叶植物的根和根际土壤样品,用改良贝曼漏斗法分离植物寄生性线虫。其中,分别从绿宝石(Philodendron erubescens cv.Green Emerald)、袖珍椰子(Chamaedorea elegans)和夏威夷椰子(Pritchardia gaudichaudii)的根际分离到3种短体线虫,经形态鉴定确认分别为:咖啡短体线虫(Pratylenchus coffeae Filipjev&Schuurmans Stekhonven,1941)、卢斯短体线虫(P.loosi Loof,1960)和落选短体线虫[P.neglectus(Rensch,1924)Filipjev&Schuurmans Stekhoven,1941]。并对这3个种线虫的形态特征进行了描述。     

辐照对桔小实蝇幼虫酶活性及虫体黑化的影响

为研究辐照实蝇的鉴别方法,采用10~160Gy辐照桔小实蝇卵和不同日龄幼虫后,分别测定单条幼虫体内的酚氧化酶(PPO)、乙酰胆碱酯酶(ACh E)、超氧化物歧化酶(SOD)的OD值,并观察虫体黑化情况。结果表明:80 Gy以上剂量辐照桔小实蝇卵、不同日龄幼虫后,能显著降低7日龄幼虫体内PPO、SOD的OD值;80 Gy以上剂量辐照桔小实蝇24 h卵和1日龄幼虫后,能显著降低其7日龄幼虫体内ACh E的OD值;因此通过测定SOD、PPP、ACh E酶活性变化,可以作为判定桔小实蝇是否经过检疫辐照处理的依据。最低以40 Gy辐照桔小实蝇卵、1日龄、2日龄幼虫后,其7日龄幼虫虫体不能黑化,而对照虫体黑化,因此观察虫体黑化亦可作为判定桔小实蝇辐照与否的依据。     

果园落地果中实蝇的除害处理技术研究

描述了果园被害落地果应用水浸和在果园地面覆盖塑料薄膜方法,对果实中实蝇进行除害处理技术研究,桔小实蝇一龄、二龄、三龄幼虫水中浸泡96h,死亡率均达100%;果实在水中浸泡20d,果实中的实蝇幼虫完全被杀死;在果园土面应用塑料薄膜覆盖"虫果",经过30d的时间处理,实蝇幼虫和蛹死亡率100%。室内研究结果显示,果实置于密封塑料袋中处理120h,被害果实中实蝇幼虫完全死亡。结果表明,该处理技术可应用于果园中被害落地果中实蝇的除害处理。